Wyniki zostały ocenione przez dwóch obserwatorów, którzy nie byli świadomi tożsamości próbek. Ekspresja receptorów Calcium-Sensing typu dzikiego i zmutowanego
Fragmenty restrykcyjne komplementarnego DNA (cDNA) z genu ludzkiego receptora wapniowego (HuPCaR4.0) 14 dzikiego typu zligowano z pBluescript SK (-) (Stratagene, La Jolla, CA) i trzema mutacjami (Phe128Leu, Thr151Met i Glu191Lys) z powodzeniem wytworzono przez ukierunkowaną mutagenezę.25 Nie można było wytworzyć mutacji Phe612Ser, ponieważ znajdowała się ona zbyt blisko końca 3 jednego z fragmentów restrykcyjnych wykorzystywanych do ukierunkowanej mutagenezy, a mutacja Asn118Lys była nie badane. Zmutowane klony, które zweryfikowano przez sekwencjonowanie DNA obu nici, ligowano do konstruktu cDNA receptora pełnej długości w ssaczym wektorze ekspresyjnym pcDNA3 (Invitrogen, San Diego, CA). Jeden mikrogram dzikiego lub zmutowanego cDNA receptora wapniowego był związany z lipofektaminą (Gibco BRL, Gaithersburg, Md.) I transfekowany do ludzkich embrionalnych komórek nerki (HEK-293, American Type Culture Collection, numer CRL-1573), który był hodowany do 90 procentowego zlewiska w zmodyfikowanym podłożu Eagle a Dulbecco (GIBCO BRL) z dodatkiem 10 procentowej inaktywowanej termicznie serum płodowo-cielęcym (Hyclone, Logan, Utah). Czterdzieści osiem godzin po transfekcji komórki znakowano przez 18 godzin 30 .Ci [3H] inozytolu na mililitr (New England Nuclear, Boston), płukano i inkubowano przez 30 minut w podłożu Eagle a z modyfikowanym Dulbecco (bez wodorowęglanów, wapnia i magnez), uzupełniony 20 mM buforem HEPES (pH 7,45), 0,2% albuminy surowicy bydlęcej, 10 mM chlorku litu, 0,5 mM chlorku magnezu i różnymi stężeniami chlorku wapnia (0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 3,0, i 5 mM) .26 Każde stężenie wapnia badano łącznie w czterech eksperymentach transfekcji przeprowadzanych niezależnie przez dwa dni, a całkowity komórkowy wbudowany fosforan inozytolu, który się nagromadził (tj. IP + IP2 + IP3 + IP4) zmierzono metodą chromatografii jonowymiennej, 27 z wartością znormalizowaną na podstawie białka komórkowego przez pomiar całkowitej zawartości białka (oznaczenie białka BCA, Pierce, Rockford, IL). Wartości fosforanu inozytolu podano jako średnie . SE. Skuteczne pozakomórkowe stężenie wapnia wymagane dla połowy maksymalnej odpowiedzi fosforanu inozytolu dla każdego klonu pochodziło ze średniej z czterech eksperymentów transfekcji.
Wyniki
Badania kliniczne i biochemiczne
Dwudziestu z 37 badanych członków rodziny miało hipokalcemię, z których 11 miało skurcz w kręgosłupie lub napady dziecięce. Dwaj badani, Temat I-2 w Rodzinie i Podmiot I-2 w Rodzinie 2, mieli zwapnienie zwojów podstawy i napadów, a w Podmiocie I-2 w Rodzinie napady padały w dorosłym życiu. Pozostałe 9 chorych miało bezobjawową hipokalcemię, a 16 osób miało hipomagnezemię (tab. 1). Ponadto wydalanie wapnia z moczem było nieprawidłowo w zakresie prawidłowym lub wysokim w momencie początkowej diagnozy. Średni (. SE) stosunek wapnia w moczu do kreatyniny w moczu (wyrażony w miligramach wapnia na miligram kreatyniny [oraz w milimolach wapnia na milimol kreatyniny]) przed leczeniem u 11 chorych, u których był mierzony, był znacznie wyższy niż u 10 nieleczonych pacjentów z idiopatyczną lub pooperacyjną niedoczynnością przytarczyc28 (0,16 . 0,02 vs
[przypisy: hurtownia portfeli, polyporus, suprasorb ]
[podobne: jak zmienić email na allegro, perimenopauza, lilou allegro ]
Comments are closed.
Polecam sobie poczytać tutaj o konsekwencjach
[..] Blog oznaczyl uzycie nastepujacego fragmentu ortodonta Kraków[…]
Chirurg plastyczny w czasie liftingu widzi, gdzie podano kwas hialuronowy
[..] Blog oznaczyl uzycie nastepujacego fragmentu rewitalizacja pochwy[…]
Moja babcia miała raka płuca
[..] Artukul zawiera odniesienia do tresci: klinika stomatologiczna kraków[…]
Nie bardzo zrozumialem zasade tego