Rodzinny zespół hipokalcemii z hiperkalciurią spowodowaną mutacjami w receptorze wyczuwającym wapń czesc 4

Trzy z tych mutacji przewidywały substytucję leucyny (Leu) dla fenyloalaniny (Phe) w kodonie 128 (TTC do CTC) w rodzinie 2 (Figura 1A, Figura 1B i Figura 1C), substytucję metioniny (Met) dla treoniny ( Thr) w kodonie 151 (ACG do ATG) w rodzinie 3 i substytucję seryny (Ser) dla fenyloalaniny (Phe) w kodonie 612 (TTT do TCT) w rodzinie 5. Te trzy mutacje były związane ze zmianą ograniczenia. miejsce-enzymu (tabela 2), które pozwoliło na demonstrację kosegregacji mutacji z hipokalcemią w tych rodzinach (Figura 1A, Figura 1B i Figura 1C). Rysunek 2. Rysunek 2. Mutacja bodźców w eksonie 4 genu receptora wapnia w rodzinie 4. Sekwencje DNA z kodonów 189 do 192 przedmiotu II-2 i normalnego osobnika są pokazane w panelu A. Zastąpienie G-A typu dzikiego z A w jednym allelu w pierwszej pozycji kodonu 191 powoduje zmianę z glutaminianu na lizynę. Panel B pokazuje rodowód i wyniki specyficznej dla sekwencji analizy oligonukleotydowej dot blotów. Symbole stosowane dla członków rodowodu są takie, jak wskazano na rysunku 1, a proband jest oznaczony strzałką. Wykazano, że kosegregacja mutacji (Glu191Lys) z hipokalcemią w rodzinie 4 i jej brak u 55 osób z normokalcemią (N1, N2 i N3) zostały przedstawione za pomocą analizy hybrydyzacji oligonukleotydów specyficznych dla sekwencji13, ponieważ nie była związana ze zmianą strona z enzymem restrykcyjnym. Zatem niespokrewnieni normalni osobnicy i nie dotknięci chorobą Pacjenci II-3 i III-2 byli homozygotyczni pod względem sekwencji typu dzikiego. Jednak wszyscy dotknięci członkowie rodziny mieli zarówno sekwencję typu dzikiego, jak i zmutowaną.
Dwie pozostałe mutacje przewidywały substytucję lizyny (Lys) dla asparaginy (Asn) w kodonie 118 (AAC do AAA) w rodzinie i substytucję lizyny (Lys) dla glutaminianu (Glu) w kodonie 191 (GAG do AAG) w Rodzina 4 (Figura 2A i Figura 2B). Te dwie mutacje nie były związane ze zmienionymi miejscami restrykcyjnymi, a technika hybrydyzacji oligonukleotydowej specyficznej dla sekwencji20 była zatem stosowana do potwierdzenia ich koagregacji z hipokalcemią. Każda z pięciu mutacji była nieobecna w 110 allelach od 55 niespokrewnionych osób z prawidłowymi stężeniami wapnia w surowicy, co wykazało, że nie był to neutralny polimorfizm występujący u więcej niż 1% populacji.
Wszystkie pięć mutacji znalezionych przez bezpośrednią analizę sekwencji DNA zostało poprawnie zidentyfikowanych za pomocą analizy SSCP. Podobna analiza 244 pojedynczych produktów PCR genu receptora wapniowego nie konsekwentnie wykrywa żadnych innych nieprawidłowych prążków, co wskazuje na brak wyników fałszywie dodatnich. Tak więc, analiza SSCP niezawodnie wykrywa wszystkie mutacje, wynik zgodny z naszym doświadczeniem w wykrywaniu mutacji receptora wapniowego w rodzinnej łagodnej hiperkalcemii.20
Funkcjonalna charakterystyka zmutowanych receptorów wrażliwych na wapń
Figura 3. Figura 3. Ekspresja funkcjonalna w HEK-293 Komórki receptora wrażliwego na wapń i trzy receptory mutantów – Phe128Leu, Thr151Met i Glu191Lys – angażujące wzrost funkcji. Nagromadzenie całkowitych trójtoczowych fosforanów inozytolu (skorygowane względem całkowitego białka komórkowego) w komórkach transfekowanych receptorem typu dzikiego i każdym ze zmutowanych receptorów zmierzono po tym, jak transfekowane komórki inkubowano w pożywce zawierającej różne pozakomórkowe stężenia wapnia
[patrz też: sklerodermia, agaricus, celiprolol ]
[patrz też: polipektomia endoskopowa, hiperkalciuria, prohormony efekty ]